1. 검체 채취 방법
가. 혈액(Blood)
항응고제(EDTA 혹은 Heparin)가 첨가된 플라스틱 재질의 혈액 수집 튜브에 혈액을 최소 3cc 채혈한 후 4℃ 이하(냉장)의 조건으로 보관 및 운반합니다.
※ 유리 튜브는 보관 및 운반 시 파열의 위험이 있으므로 사용이 불가합니다.
나. 뇌척수액(Cerebrospinal Fluid, CSF)
환자의 척추로부터 최소 4-5cc 정도의 뇌척수액을 검사용 용기에 채취한 후 4℃ 이하(냉장)의 조건으로 보관 및 운반합니다.
※ 유리 튜브는 냉동보관 및 운반 시 파열의 위험이 있을 뿐만 아니라 뇌척수액의 단백질이 유리 튜브 표면에 부착되므로 사용이 불가합니다.
다. 병원성 프리온 단백질(PrPSc) 웨스턴 블럿 실험을 위한 뇌 및 편도선 생검 조직 준비
환자 뇌의 전·측두엽(Frontotemporal Region) 부위에서 Stereotaxic 방법으로 뇌조직은 최소한 200 mg, 편도조직의 경우 500 mg 이상을 취득하여 세포 보관용 용기(Cryogenic vial 등)에 담아 –70℃ 이하에서 보관하고 가능한 냉동 조건으로 발송 및 운반합니다.
라. 면역조직화학 염색검사를 위한 뇌 생검조직(Biopsy Tissues from Brain)
환자 뇌의 전·측두엽(Frontotemporal Region) 부위에서 최소한 2mm×5mm 크기의 뇌조직 3개 이상을 부검을 통해 취득하여 10% Neutral Formalin속에 고정한 후 발송 및 운반합니다.
2. 실험실 진단 방법
가. 뇌척수액을 이용한 분석
- 웨스턴-블럿(Western immunoblot, WB)방법으로 14-3-3 단백질의 검출 여부를 조사함.
- 효소면역 정량법(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)으로 total Tau 및 Ab42 단백질의 검출량을 측정함.
- RT-QuIC 또는 modified-PMCA 방법을 이용하여 뇌척수액에서 병원성 프리온 단백질(PrPSc)의 검출 여부를 확인함.
나. 혈액을 이용한 분석
- 의뢰 환자의 혈액에서 DNA extraction kit로 genomic DNA를 추출한 후 중합효소 연쇄 반응(polymerase chain reaction, PCR)을 수행하여 프리온 유전자를 증폭함.
- 증폭된 프리온 유전자의 염기서열 분석을 시행하여 돌연변이 및 다형성 유무를 확인함.
다. 뇌조직을 이용한 분석
- 환자의 조직이 확보된 경우 뇌조직을 균질화한 후 웨스턴-블럿 방법으로 단백질 분해효소(proteinase K, PK)에 저항성을 가지는 변형 프리온 단백의 검출 여부를 확인함.
- 환자의 조직을 포매하여 조직 블록을 만든 후 연속 절편을 만듦. H&E 염색 후 뇌조직의 형태를 관찰하여 프리온 질환에 특징적인 변화인 신경세포 소실 및 공포화(vacuolation) 현상이 관찰되는지 확인하고 면역염색을 통해 뇌조직 내 PK 저항성을 보이는 프리온 단백의 검출 여부 및 아밀로이드 플라크(amyloid plaque)의 관찰 등의 신경 병리 소견을 조사함.
3. 검체 포장 및 진단센터로의 전달 방법
프리온 질환으로 의심되는 환자의 검체는 앞에서 기술한 검체 채취 방법으로 취득한 후 프리온 검체의 포장 운송 규정에 따라 포장하고 CJD 진단 의뢰서(환자의 병력, 뇌파소견, CT 혹은 MRI 결과 등 기술)와 함께 한림대학교 크로이츠펠트-야콥병 진단센터로 발송/전달합니다.
가. 뇌/편도 조직 검체 포장방법 (감염성물질 카테고리 A 포장 기준 - 3중 안전포장)
- 1차 용기(검체채취용기-내용물 유출방지)에 병원명, 환자명, 성별, 나이, 채취일을 정확히 표기.
- 1차 용기를 검체봉투에 넣어 단단히 밀봉함.
- 밀봉된 1차 용기를 충격완화제(1차용기 파손 방지-에어비닐 등)와 함께 2차 안전 수송 용기(방수 및 누수방지 용기-플라스틱 등)에 넣고 뚜껑을 잠금.
- 2차 안전 수송용기를 3차 포장용기(박스)에 넣고 겉면에 발송인의 정보(이름, 주소, 응급상황 시 연락처 등)를 정확히 기재함.
< 3중 포장방법 예시 >
나. 수송방법
당일 전달 가능한 지역에서는 직접 센터로 전달되어야 하나 타지역의 경우 국내 전지역을 48시간 이내에 전달 체계가 갖추어진 검체 이송 전문 업체를 이용하여 진단센터로 검체를 수송해야 합니다. 이때는 본 전달 용기의 내용물이 전염성 병원체라는 것을 통지하여 전달과정에서 안전관리에 최선을 다하도록 해야 합니다.
다. 센터 정보
- 주 소 : 07247 서울시 영등포구 버드나루로 55 한강성심병원 도헌연구센터 일송생명과학연구소 8층
- 대표전화 : 02-6923-8211, 8215
- 접수시간 : 월요일~금요일, 오전 9시 ~ 오후 5시
※ 주말, 공휴일은 검체를 받지 않습니다.
※ 지방에서 택배로 발송하실 경우 금요일 오후 5시까지 검체를 받을 수 있도록 해 주시기 바랍니다. 금요일 도착이 불가능할 시 검체를 냉장고에 냉장(4℃ 이하) 보관한 후 월요일에 발송하셔도 검사결과에 영향을 주지 않습니다.